Molekulare genetesch Fuerschung Method

Fir Entdeckung an z'identifizéieren Varianten an DNA Struktur benotzt molekulare genetesch Method. Fir all DNA Regioun, déi dës Regioun vun der chromosome, Gene oder allele inspizeiert, ënnerscheeden der Methode. all molekulare genetesch Method Basisdaten regruppéiert eng oder aner Manipulatioun vun RNS an DNA. All dës Methode sinn duerch eng enorm Komplexitéit charakteriséiert, ouni Labo Konditiounen kann net duerchgefouert ginn, an d'Personal muss héichqualifizéiert ginn. Dëst Wierk ass an e puer Etappe gemaach.

Etappe

Éischt, RNS oder DNA Echantillon gin produzéiert. Hei, kann ee molekulare genetesch Method fir quasi all Material applizéiert ginn: eng Lëscht vun Blutt, leukocytes, Här iwert mech selwer Kultur, mucosa (knappen), och d'Hoer follicles, - DNA kann aus all Prouf kritt ginn. Et ass gëeegent all molekulare genetesch Methoden an hir verschidde Méiglechkeeten ze benotzen an hunn laang isoléiert DNA gefruer ass gespäichert. Déi zweet Etapp ass fir de Heefung vun der gewënschter Fragmenter (amplification) vun DNA engagéierten, wéi et der polymerase Kette Reaktioun kënschtlech (ouni Bedeelegung kënschtlech iwerfriess Liewensstandard) hëlleft garantéieren. Als Resultat, der gewielter DNA Brochstéck multiplies vun dëser Ketten Reaktioun, an de Montant vun DNA vergréissert wuertwiertlech Millioune mol.

Déi drëtt Etapp vun der molekulare genetesch Fuerschung Methode ass doubelt DNA Restriktioun (dëst véiermol, ginn oder opzedeelen) ugeholl. Restriktioun vun electrophoresis op engem polyacrylamide oder agarose gelies gesuergt. Dëst molekulare-genetesch Method der DNA Brochstéck vun studéiert erlaabt jiddereen eng gewësse Positioun an der gelies ze huelen. Ausgezeechent, ass de gelies mat ethidium bromide behandelt erwisen vun bis DNA obligatoresch, de irradiation mat violett Liicht, dann ass et méiglech luminescence Portiounen ze observéieren. Molekulare genetesch Diagnostice Methode sinn variéiert a villen, mee déi éischt zwee Schrëtt sinn gemeinsam un all. Mä fir DNA Fragmenter ze identifizéieren, kann de gelies faarweg ginn, a vill aner bestehend Methoden.

Arten

De stäerkste direkt an verbreet Methode fir fonnt mycobacteria kann heivun molekulare genetesch DNA Léieren Method gehéiert. Seng Essenz ass, datt, fir de Scanner Kette Material vun spezifesch Fragmenter vun DNA vun pathogens z'identifizéieren. Molekulare genetesch Diagnostice Techniken hun do nach net eng méi efficace Manéier, wéi Krankheeten wéi Tuberkulos ze erkenne. Mat der polymerase Kette Reaktioun (Hinnen alleguer), kënnt Dir sécher sinn, datt d'Original DNA gëtt d'Zuel vun Exemplairen an enger Millioune mol méi, dat ass, wäert et amplification ginn, an et wäert d'Resultater Kaart. Der Empfindlechkeet Niveau ass Héich - méi wéi nonzeg-fënnef Prozent, déi den Haaptgrond Virdeel vun dëser Method ass.

De Rescht vun der molekulare-genetesch Methode vun Fuerschung iwwert d'Efficacitéit vun nozeginn MÉI Exemplare verduebelt wuertwiertlech, well an dësem Fall d'Ausschaffe Prouf eng spezifesch oligonucleotide Haaptrei zu honnert a sechs mol fräi weist. Och d'Kultur Diagnos vun Tuberkulos vun der Otemsweeër vill seng Empfindlechkeet niddreg. Dofir modern Medezin op molekulare genetesch Methode vun Diagnos vun Tuberkulos baséiert ass. A beschriwwe Method ass besonnesch efficace wann mat pathogens vun héich antigenic Verännerlechkeet senden, festzestellen datt aner Manéier ass vill méi schwéier - verlaangt speziell Nährwert Medien a laang Zäit Stat. Biochemical a molekulare genetesch Methode produzéiere ganz verschiddene Effekt op d'Resultater.

Diagnos vun Tuberkulos

Marshall Hinnen alleguer Diagnos vun Tuberkulos meescht allgemeng deenen DNA e Message mat, datt fir all véier Zorte vun der Krankheet spezifesch sinn. Ze erreechen benotzen dëse Schoss oft primers datt Haaptrei entdecken ASS Elementer (ASS-986, ASS-6110), wéi dës Elementer Markenzeeche héich Klimawandel Arten Mycobacterium Tuberkulos an ëmmer präsent MÉI Kopien am Nepgen. Och kann DNA Reduktioun aus reng Kulturen a Séminairen (sputum vun Patienten) duerch all aner gëeegent Method duerchgefouert ginn. Zum Beispill, Boom Method do wou de lysis Prellbock baséiert op der guanidine thiocyanate an Silikatsubstrat wéi de Numm DNA benotzt. D'Zuel vun de Patienten, déi all Joer aarmséileg bacteriological waarden, an dofir vun Séminairen Praxis ënnerscheeden huet eng komplett anescht gefall etabléiert: molekulare-genetesch Method vun DNA studéiert huet eng grouss Roll an der Diagnos gouf gespillt.

musse mir awer zouginn, dass et net ouni Nodeeler ass. D'Hinnen alleguer Method ass de Gebrauch vun oft eng grouss Zuel vu falschen-positiv Resultater bréngt, an de Grond ass net nëmmen technesch Feeler, mä och d'Fonctioune vun der Method selwer. Zousätzlech, dës Method vun Diagnos mat der d'Wirtschaftlechkeet vun mycobacteria ze bestëmmen, déi identifizéiert goufen, ass et einfach onméiglech. Mä dëst Nodeel ass net déi wichtegst. Molekulare genetesch Methode vun Hinnen alleguer Diagnos wat de Risiko vu kontaminéierte mycobacterial DNA. Zertifikatioun Viraussetzunge fir dës Grond dass fir Hinnen alleguer Laboratoiren exklusiv schwéier entworf, si verlaangen dräi separat Raimlechkeeten. Hinnen alleguer Technologie ass modern a ganz komplex, et verlaangt de Gebrauch vun richtegt Équipement an héich-trainéiert Personal.

bacterioscopy

Séminairen Ënnersichung, radiography, Letztebuergeschen ged microscopy, Boun an och Äntwert op eng spezifesch behandelt sinn ganz wichteg: Wann d'Diagnos Resultater vun der Analyse muss mat aneren Date Verglach ginn. An dëser Serie, ass de Hinnen alleguer Studien nëmmen ee vun de Voleten. Mengt der pathogen an der fréi Diagnos kann de einfach an normal Methode ginn - bacteriological.

Et gëtt e Liicht microscope (gemoolt Ziehl-Neelsen) an unisse (gemoolt fluorochromes) benotzt. De Virdeel ass Vitesse Letztebuergeschen ged de Resultater. Mee seng Nodeel ass zu Recht d'limitéiert Muecht wéinst niddereg Empfindlechkeet considéréiert. Allerdéngs ass dës Method DEI Parrainage wéi déi wiertschaftlech entscheet an de Buedem Tuberkulos Patienten ze entdecken. Detectioun vun mycobacteria bacteriological Method huet Cepheid Wäert an geschate quantitativ bakteriell excretion. Vill méi Vertrauen mat et molekulare genetesch Fuerschung Methode vun Tuberkulos ze këmmeren.

Kulturen

Besser erkennen mycobacteria erkenne kulturell Studien. Dräizéng agebousst Material et duerch d'Eeër mëttel- gemaach ass: Mordovsky, Finn II, LJ a wëll. Grondsteen leeën vun Resistenz vun mycobacteria fir Medikamenter an indirekt Beweis vun der Efficacitéit vun enger Zuel vun mycobacteria an hir Kolonien kënschtlech, wann der applizéiert Method vun Fuerschung Kultur. Fir de Prozentsaz vun Isolatioun vun mycobacteria inoculation vun agebousst Material Erhéijung ass op MÉI Ëmfeld ofgehalen.

Sëtzung de Besoine vun villen kulturellen, pathogen dorënner Subventiounen a Flëssegkeeten. Gebraucht an dësem System a automatiséiert metering Typ VANTES Wuesstem. Eréischt muss fir bis zu siwe bis aacht Wochen am incubation ofgehale ginn. Vun dëser Zäit kann d'Boun mat der opgepasst Wuesstem negativ ginn considéréiert. De stäerkste effikass Manéier Mycobacterium Tuberkulos ze entdecken betruecht biologescher Echantillon: Diagnostice Material globalen gewinnt haten, deen extrem ufälleg fir wuel sinn.

puer Zuelen

Interessant Gebitt vun der Etude, déi vun Hinnen alleguer Diagnos opgemaach huet sech d'M. Tuberkulos ze studéieren - Uklang fonnt Krankheet. D'modern Konzept vun wuel Krankheet mobiliséiert aus honnert Leit déi deen am Kontakt mat M. Tuberkulos goufen, nonzeg-vläicht gutt Krankheet ginn, mä nëmmen zéng vun hinnen sinn aktiv Krankheet entwéckelt gëtt. Anerer hu wuel excellence, an well nonzeg Prozent vun de Fäll bleift d'Krankheet Uklang fonnt. Entdecken engem Muster et huet eng molekulare genetesch Method gehollef.

Geneticists soen dass fofzeg-fënnef Prozent vun deenen, deenen hir eréischt agebousst Material sech negativ, an uechtzeg Prozent vun de Leit mat M. Tuberkulos Krankheet, mä mat kee Lëtzebuergesch Manifestatiounen vun Krankheet leeft, Hinnen alleguer positiv Äntwerte kritt. Et ass eng genetesch Diagnostice Method gehollef Patienten Risiko vun Hinnen alleguer Studien ze identifizéieren, mat de Resultater vun hirer Analysë (microscopy a Kultur) waren negativ, an subclinical Krankheet M. Tuberkulos war presentéieren.

modern Fuerschung

Der russescher Federatioun an bacteriological Laboratoiren benotzen en scho Method vun absolute Konzentratioune: Nitratveruerdnung reductase Aktivitéit vun mycobacteria vun Griess reagent getest. Anti-wuel Zentren benotzen eng Method, datt Drogenofhängeger Resistenz ze bestëmmen erlaabt. Dëst Auslousung vun Flëssegket Medien, wou radiometric an unisse Comptablesmethod System Wuesstem vun mycobacteria automatiséiert. Sou ass eng Analyse séier gemaach - bis zu zwou Wochen.

Moment, ginn nei Methode entwéckelt: Drogenofhängeger Resistenz vun mycobacteria ass um genotype Niveau gemooss. Etude vun der molekulare Mechanismen vun Resistenz Genen a weist der Präsenz vun mycobacteria. Dës Genen sinn mat Resistenz zu bestëmmte Drogen assoziéiert. Zum Beispill, Kasa Genen, inhA, katG resistent géint isoniazid, rpoB Gene - rifampicin 16Sp RNS Genen an rpsL - streptomycin, emb1 - zu ethambutol, gyrA - e fluoroquinolone an sou op.

déi kennen

D'modern Diagnos fräi vill de molekulare-genetesch Niveau Method fir DNA studéiert an erlaabt ze grouss-Skala Studien vun Projet'en an all hire Spektrum üben. Elo wëssen mer dass déi gemeinsam Projet'en an der 516, 526 an 531 codons der rpoB Gene, an der Resistenz zu verschiddenen Drogen identifizéiert. Et gëtt eng ganz Rei vu Methoden fir d'per vun mycobacteria benotzt net nëmmen traditionell Methode - biochemical, biologesch a kulturell, mä och dagsiwwer modern molekulare genetesch Techniken benotzt. Schonn do sinn adäquat an déi déi richteg Diagnos Method fir d'Detectioun vun monogenic Krankheeten. Si sinn an der exakt Beräich vun engem bestëmmte Gene op DNA Studien baséiert. Dat ass normalerweis e komplexe Prozess, Zäit opwänneg an deier, mä d'Donnéeën, datt duerch molekulare genetesch Analyse gëtt ass, ass vill méi genee an iwwer d'Date vun all anere Analysë.

Et huet laang bekannt ginn, datt d'DNA änneren net fir d'ganzt Liewe vun der iwerfriess datt et zu all nucleated Zellen odnakova ass, an dat mécht et méiglech d'Analyse vun absolut all Zellen vum Kierper, bei all Etapp vun ontogeny ze huelen. D'beschiedegt Gene kann virum Optrëtt vun den éischte Symptomer fir déi voll-Skala Medeziner Krankheet fonnt ginn, wéi och an gesond heterozygous Leit, mä e stattfannen am Gene mussen. Molekulare genetesch Ierfgroussherzog Krankheet Diagnostice Methoden erlaabt seng (direkt Approche, DNA-Diagnos) fir opzeweisen, wéi och d'Segregatioun vun der Krankheet an der Famill mat Bewaacher loci DNA (genetesch schiefgang) ze analyséieren, wat mat enger beschiedegt Gene enk verbonne sinn (dh, der indirekter Approche vun DNA-Diagnos). Direkt oder indirekt - ass keng DNA Diagnos baséiert op de Methode vun engem streng definéiert Deel vun der Mënschheet DNA Identifikatioun.

direkt Methode

Direkt Methode vun DNA Diagnos sinn wann d'Kriminell Gene Ierfgroussherzog Krankheet bekannt ass, wéi och bekannt, an Zorte vu sengem kennen. Zum Beispill, eng konvenabel direkt Methode vun enger Zuel vu Krankheeten. Dëst Huntington d'chorea (Extensioun CTG-Widerhuelung), phenylketonuria (R408W), fir mech fibrosis (delF508, gréisser Projet'en) an der wëll. D'Haaptrei Virdeel vun der direkter Method ass eng komplett dorop-Besëtz Diagnostice Richtegkeet, an et ass net néideg eng DNA Analyse vun de Rescht vun der Famill ze maachen. Wann e stattfannen am entspriechende Gene fonnt ass, erlaabt et genee engem Diagnos vun heredity, genotype Determinatioun fir de Rescht vun der Famill Relatiounen betrëfft stëmmen.

Anere Virdeel vun direkten Diagnos ass als eng heterozygous Numm vun schlecht kennen aus Famill an Elteren ze identifizéieren, déi vun der Krankheet gestuerwen. Dëst ass virun allem wouer fir Krankheeten recessive autosomal. Nodeeler vun direkt Methode sinn och disponibel. Fir wat si, muss Dir wëssen, genee localize de Manque Gene, Exon-intron Struktur vu sengem Spektrum an hir kennen. Net all monogenic Krankheeten haut hunn esou Informatiounen kritt. Informativeness direkt Methode kann net komplett considéréiert ginn, well een an der selwechter Gene enger grousser Zuel vun agebousst stattfannen muss kënnen, datt Entwécklung vun Ierfgroussherzog Krankheeten bewierkt.

indirekt Methoden

Indirekt Methoden an DNA Diagnos sinn op all, an anere Fäll benotzt, wann de beschiedegt Gene net identifizéiert ass, mä nëmmen chromosomally, oder wann der Linn Diagnos gemaach ginn net d'Resultat (et geschitt, wann d'Gene komplex molekulare Organisatioun oder engem groussen Deel, wann et vill sinn agebousst déi kennen). Indirekt Methoden gesuergt Segregatioun Analyse vun polymorphic lues an allelic Famill. Lues an der selwechter chromosomal Regioun oder nët fonnt ass enk un der Krankheet Hausnummeren an vertrieden geläscht oder insertions, Punkt wier, Widerhuelung, an hir polymorphism ass fir verschidde Betrag vun Zellen an der Spär wéinst.

Meeschter praktesch fir indirekt Diagnos als microsatellite an minisatellite schiefgang, déi an der mënschlecher Nepgen dicht verdeelt sinn. hire Wäert ausgedréckt an héich Informatiounen Inhalt, wann Schued fir d'genetesch Distanz tëscht dem Bewaacher geflitzt an de Gene net ze grouss ass. Am leschte Fall ass d'Estimatioun Richtegkeet zu engem groussen Deel der Frequenz vun recombination tëscht dem polymorphic Bewaacher geflitzt an Schued alles. Indirekt Diagnostice Methoden déi och Musse virleefeg Schrëtt vun allele Ofstänn vun der Populatioun analyséiert studéieren ënnert Patienten an wwerreeche vun Projet'en, plus d'Noutwennegkeet vun der Wahrscheinlechkeet vun recombination vun nonequilibrium an Haftung lues a Mann- alleles Bestëmmung.

aner Methoden

Kuerz Segmenter vun RNS oder DNA, wéi och eenzel Gene ënner microscopic Etude visualized kann net sinn, also, op déi kennen identifizéieren duerch molekulare genetesch Diagnos waren. Et ass eng "Mënscherechter Genom Project", wéi och aner Fortschrëtter vun molekulare Genetik immens der Méiglechkeet vun der Diagnos vum Ierfgroussherzog Krankheeten erweidert - souwuel Ethikcode an postnatal. Dës Methode kann fréi ze erkennen déi an engem Cepheid poly- an monogenic Krankheeten maachen, deenen hir Debut hëlt Plaz an Nesset. Leider sinn wéinst der technesch Capacitéite vun molekulare genetesch Studien heiansdo doriwwer eraus der ethesch Grenzen déi a Relatioun zu Ierfschaft Formatioun sinn, virun allem wann d'Diagnos vun Enregistrement seng eege Stëmm a Kand ass.

Strukturell an z'identifizéieren chromosomal abnormalities sinn déi gemeinsam Ursaachen vun Krankheet a Kriibs, a vill féieren. Chromosomal geometrescher Figur brauchen identifizéiert ginn, déi fir Familljeberodung wichteg ass - d'Prognosen ze bewäerten, zesumme mat reproduktive Risiko an Zukunft Schwangerschafte. Chromosome Analyse ass de "Gold Standard" vun genetesch Diagnos, mä et ass limitéiert. Nëmmen d'Methoden vun molekulare genetesch Analyse kënnen méi maachen, well do Klone benotzt Technologie baséiert unisse Etiketten kapabel vun hir héich Empfindlechkeet dezent chromosomal Ännerungen ze identifizéieren déi onméiglech sinn ze klassescher entdecken cytogenetic Studien. Dës Techniken sinn ëmmer méi eisen Diagnostice Kënnen Ausbau, wann iwwerpréift, Kanner mat enger Behënnerung Entwécklungsphase, mental retardation, mat vill aner Ierfgroussherzog Krankheeten.

Conclusiounen

Et ass ganz wichteg fir Mënschlechkeet goufen d'Gene Struktur an Funktioun vun Wëssen, Zorte vu Verännerlechkeet, der Fähegkeet Ierfgroussherzog Krankheeten ze entdecken, datt am Zesummenhang mat der Entwécklung vun molekulare Genetik geschitt. seng Methoden sinn an der Etude vun der DNA Protein dofir geduecht - a wann et ass normal, an wann et beschiedegt ass. Virbereedung vun deoxyribonucleic sauerem e Message vun nucleotides (DNA) Preventioun an Etappe vum Echantillon feieren eenzelne Fragmenter z'identifizéieren. Isolatioun vun Frankräich DNA aus dem Zellen, Restriktioun (ginn), amplification (Klone), electrophoresis vun der Fragmenter (ofgetrennt hir elektresch Vitesse a molekulare Gewiicht vun agarose gelies). Identifikatioun vun spezifesch op der Uewerfläch vun engem diskret Sträif matzen Fragmenter.

Dann de Akt agetriichtert, an speziell Filtere, duerch déi Visiteuren all Brochstéck hybridization mat gekloonten DNA Fragmenter oder syntheteschen radioaktiv Ämter ass eng Kontroll, déi zu all Test Prouf selwecht ginn. Wann Dir d'Positioun oder Längt Verglach ännere mat der SUGGERÉIEREN, wann eng nei Brochstéck oder verschwonnen - all dat seet datt d'analyséiert Gene weiderentwéckelt huet an der Nukleotid Haaptrei Restrukturatioun. Et sinn aacht Basis Techniken vun molekulare genetesch Studien: sequencing (Determinatioun vun DNA Haaptrei), polymerase Kette Reaktioun (Erhéijung vun der Zuel vun de Message), der Virbereedung vun primers bekannt Genen, DNA Klone, Produktioun vun recombinant Molekülle ofgeleet Proteinen wéinst recombinant Molekülle, eng komplett Formatioun schafen (Kollektioun Bibliothéik) gekloonten Fragmenter datt duerch Hëllef Restriktioun kritt huet.